苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定。多糖-苯酚-硫酸显色反应体系的一阶导数光谱值与多糖含量成正比，据此建立了苯酚-硫酸显色导数光谱分析多糖的方法 。该方法也被成功建立为微量检测体系，并可采用酶标仪进行检测 。
该方法可用于测定总糖含量 。蛋白质的存在对显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定，还可用于己糖甲基化衍生物和6-脱氧核糖、戊糖的测定 。在测定葡萄酒中总糖含量时，需先用沉淀剂除去蛋白质、单宁酸等杂质并脱色 。该方法也被用于测定壳寡糖含量 。
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